x
订货一
订货二
客户积分查询兑换
渠道
联系我们


华越洋生物
电话:010-59564618
传真:010-52833138
24小时*7服务电话:150 1148 1284 技术/投诉建议:132 6005 2021 QQ:1365647552
邮箱:[email protected]
首页 > 产品中心 > 酵母感受态细胞 > Y1hgold酵母感受态细胞
 
Y1hgold酵母感受态细胞
Y1HGold酵母感受态细胞

产品名称:Y1HGold酵母感受态细胞

产品简介:

               Y1HGold酵母感受态细胞,购买感受态赠YPD培养基一瓶

编号

名称

规格

品牌

说明书

WR0221-100

  Y1HGold酵母感受态细胞

10*100UL

 waryong

 

WR0221-100

   Y1HGold酵母感受态细胞

20*100UL

waryong 

 

 Y1HGold Chemically Competent Cell 产品说明书

  Y1HGold酵母感受态细胞产品规格

Y1HGold:                    10×100μl            保存条件:-80℃

pAbAi(control vector):10ng/μl      10μl            保存条件:  4℃

Carrier DNA:          5ug/μl    100 μl            保存条件: -20℃

PEG/LiAc:                        5 ml            保存条件:  4℃

因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met–, MEL1

  Y1HGold酵母感受态细胞产品说明

Y1HGold菌株是Clontech公司开发的GAL4-AbA酵母单杂系统用菌株,MATα型,可直接转化质粒进行筛库试验。Transformation marker为: ura3,leu2;报告基因为:AbAr。Y1HGold -GAL4-AbA酵母单杂系统需要两种质粒配套使用:pAbAi和PGADT7。质粒pAbAi的筛选标志为URA,用于表达 pBait-AbAi construct (1~3个bait DNA序列重复串联后克隆到pAbAi中);质粒PGADT7的筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4-AbA酵母单杂系统原理:Aureobasidin A (AbA)是一种环酯肽抗生素,在低浓度(0.1-0.2ug/ml) 下即可对酵母产生毒性。基因组中整合了pBait-AbAi 的酵母菌株(Bait-Reporter Yeast Strains),当猎物蛋白(Prey)结合到诱饵序列(Bait DNA)上,GAL4 AD就会激活AbAr 的表达,从而能够在含有抗生素AbA的培养基上生长。AbAr与营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点,可以降低酵母单杂假阳性发生的概率。High5TM系列Y1HGold感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,经pAbAi质粒检测转化效率>103cfu/μg DNA 。

Y1HGold酵母感受态细胞操作方法

1. 取pBait-AbAi质粒5ug,BstBI 或 BbsI酶切1小时,回收。

2. 取100 μl冰上融化的Y1HGold感受态细胞,依次加入预冷的线性pBait-AbAi质粒1-5ug(体积不高于15ul),Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴,重复一次)10 ul ,PEG/LiAc  500ul并吸打几次混匀,30度水浴30 分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。

3. 将管放42度水浴15min  (7.5 min时翻转6-8次混匀)。  

4. 5000 rpm 离心 40s 弃上清,ddH2O 400ul 重悬,离心 30s 弃上清。                      

5. ddH2O 50ul重悬,涂SD/-Ura平板,29℃培养72h。

6. 挑取5-10个克隆,用PCR方法确定pBait-AbAi整合到Y1HGold基因组中,PCR阳性菌株在SD/-Ura平板划线,29℃培养72h,4℃保存,此菌株即是Y1HGold[Bait/AbAi]菌株。

 Y1HGold酵母感受态细胞

Preparation of Media:

YPDA (1L):

 Tryptone               20g

 yeast extract            10g 

 0.2% adenine           15ml

 补水到 950ml,  用盐酸调PH到6.5

 Agar                20g (for plates only)

 121度,15分钟高压灭菌,

 待培养基温度降到55度时,加

 入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml

 

0.2% adenine(1L)

 Adenine    2g

 补水   到1L

 溶解后高压灭菌

 或0.22um 滤膜过滤除菌

 Y1HGold酵母感受态细胞

注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. Y1HGold酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,Y1HGold的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆。

 

DB3.1感受态细胞面向全国现货促销:

 GV3101感受态细胞火热促销中》》》

stbl3感受态细胞

LBA4404感受态细胞

XL1-Blue感受态细胞

DH10Bac感受态细胞

ER2566感受态细胞

BJ5183感受态细胞

DB3.1感受态细胞

JM110感受态细胞

GV3101感受态细胞

SURE感受态细胞

SOC培养基,SOB培养基,LB培养基,配制方法,AT克隆试剂盒

BL21(DE3)感受态细胞

TB1感受态细胞

EGY48酵母菌感受态细胞

EGY48感受态细胞

AH109酵母感受态细胞

HMS174

Y187酵母感受态细胞

XL2-Blue感受态细胞

平板涂布专用玻璃珠

stbl3感受态细胞

NMY51酵母感受态细胞

TG1感受态细胞,TG1感受态细胞

EHA105感受态细胞

Stbl2感受态细胞

DH10B感受态细胞

T1感受态细胞

sure感受态细胞

AGL1农杆菌感受态细胞

M15感受态细胞

HB101感受态细胞

JM109感受态细胞

Y1HGold酵母感受态细胞

Rosseta(DE3)感受态细胞

TG1感受态细胞

XL10-Gold 感受态细胞

农杆菌感受态细胞

大肠杆菌感受态细胞

DH5α感受态细胞

TOP10感受态细胞

C43, C43(DE3)感受态细胞

Mach1-T1PhageResistant

 OrigamiB,OrigamiB(DE3),OrigamiB(DE3)pLysS,OrigamiB(DE3)pLacI

C41(DE3), C41(DE3)PlysS感受态细胞

Y2HGold 感受态细胞

MC1061感受态细胞

EHA103感受态细胞

RN4220感受态细胞

ER2738感受态细胞

B834B834(DE3) B834(DE3)pLysS

AD494感受态细胞

BLR受态细胞

DMT感受态细胞

TKB1感受态细胞

重组金黄色葡萄球菌蛋白A

Origami感受态细胞

产品特点:
产品应用: 0
疯狂抢购
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • ¥150元
    质粒DNA提取,PCR产物纯化
  • ¥1280元
    特级胎牛血清( Fetal Bovine Serm hyclone sv30087.2 )
  • ¥750元
    掌上迷你离心机
  • ¥3750元
    罗氏II型高效地高辛DNA标记和检测试剂盒
  • ¥890元
    内毒素清除剂
  • Gus染色试剂盒 ,GUS染色液,gus染色
  • ¥电询
    Abcam抗体
  • stbl3感受态,stbl3感受态细胞,stbl3
  • ¥电询
    罗氏race试剂盒
  • 2,4-表油菜素内酯,表油菜素内酯,芸苔素内酯
    2,4-表油菜素内酯,表油菜素内酯,芸苔素内酯
  • ¥电询
    stbl2感受态细胞,stbl2感受态细胞
  • ¥1180元
    trizol(invitrogen)
  • ¥290元
    DNA组织常温保存液,DNA组织样品保存液,非冻型DNA组织保存液
  • top10f'感受态细胞,top10f'感受态
  • 醋酸洋红染色液,醋酸洋红染色液
  • 潮霉素B溶液, Hygromycin B ,潮霉素B即用型溶液
  • 钙黄绿素,Calcein
    钙黄绿素,Calcein
  • 血液DNA保存液,血液DNA常温保存液
  • ¥1780元
    invitrogen脂质体2000,lip2000
    转染试剂
  • ¥198元
    链脲佐菌素, Streptozocin STZ
Copyright © 2011 huayueyang.com All rights reserved.  
京ICP备11010654号