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反转录试剂盒CB型
反转录试剂盒CB型

产品名称:反转录试剂盒CB型

产品简介:

反转录试剂盒(第一链合成试剂盒)

Script cDNA Synthesis Kit(WX2050)
 
产品简介:
本产品是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒中使用的Script逆转录酶是M-MLV由来的新型高效逆转录酶,新颖突变位点大幅提升酶的转录活性,cDNA第一链合成的效率和产量更高,可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA第一链。点突变消除RNase H活性,酶的延伸性能提高,有效改善逆转录酶与RNA模板的亲和力,可获得长至12 kb的cDNA。精心优化的RT Buffer使逆转录酶应用范围更广,对后续的PCR以及定量PCR实验兼容性高。该试剂盒配备所有逆转录试剂,使用简单方便。适用于第一链cDNA的合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR,以及全长cDNA文库的构建等。本试剂盒有以下特点:
1.高效的逆转录效率:新颖突变位点大幅提升酶活性能,获得更高产量的cDNA。
2.良好的延伸能力:点突变消除RNase H活性,改善逆转录酶与RNA模板的亲和力,可获得长至12 kb的cDNA。
3.灵敏度高:可利用pg级的总RNA或mRNA模板合成cDNA第一链。
4.使用方便:逆转录试剂盒中已配备所有逆转录试剂,仅需准备模板即可轻松完成逆转录。
 
产品构成:

 
Component
 
100 rxns
 
Script,200 U/μl
 
100 μl
 
5×RT Buffer
 
500 μl
 
Primer Mix
 
240 μl
 
dNTP Mix,2.5 mM Each
 
500 μl
 
DTT,0.1 M
 
240 μl
 
RNase-Free Water
 
1 ml

保存条件:-20
 
注意事项:
1.在操作过程中应避免RNase污染,防止RNA降解或实验中的交叉污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2.实验尽量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37处理12小时,并在120下高压灭菌30分钟后使用,或者将玻璃器皿在180下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3.本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20,避免反复冻融。
4.若起始RNA的量小于50 ng,建议加入RNA酶抑制剂。
 
 
 
 
操作步骤:注意:1 ng-5 μg总RNA可建立20 μl反应体系,如果总RNA量大于5 μg,请按比例扩大反应体系。
 
I. 逆转录操作步骤:
 
1.将RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、Script和RNase-Free
 
Water溶解并置于冰上备用。
 
2.根据以下表格配制反应体系,总体积为20 μl。
 

 
试剂
20 μl反应体系
终浓度
 
dNTP Mix,2.5 mM Each
4 μl
500 μM Each
 
Primer Mix
2 μl
 
 
RNA Template
X μl
50 pg-5μg
 
5×RT Buffer
4 μl
     1×
 
DTT,0.1 M
2 μl
10 mM
 
Script  200 U/μl
1 μl
 
 
RNase-Free Water
up to 20 μl
 

 
注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,则建议加入RNA酶抑制剂
 
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。
 
3.涡旋震荡混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
 
4.cDNA合成反应条件:
 
1)若下游进行荧光定量PCR检测,42孵育15分钟,85孵育5分钟。
 
2)若下游进行普通PCR检测,42孵育30-50分钟,85孵育5分钟。
 
注意:对于二级结构复杂或GC含量高的模板,可以提高逆转录温度至50,增强逆转录效率。
 
5.反应结束后,短暂离心,置于冰上冷却。
 
6. 逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应,或置于-20长期保存。

产品特点:
产品应用: 0
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