产品名称：NMY51酵母感受态细胞

产品简介：

            NMY51酵母感受态细胞，赠送YPD培养基，酵母DNA提取试剂盒，酵母破壁溶液

    NMY51 Chemically Competent Cell 产品说明书

产品规格

NMY51：                     10×100μl            保存条件：- 80℃

PGADT7（control vector）：10ng/μl    10μl            保存条件：  4℃

Carrier DNA：            5ug/μl   100 μl            保存条件： -20℃

PEG/LiAc ：                       5 ml            保存条件：  4℃

  NMY51酵母感受态细胞基因型

MATa his3Δ200 trp1-901 leu2-3,112 ade2 LYS2::(lexAop)4-HIS3 ura3::(lexAop)8-lacZ ade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4

操作方法

1. 取100 μl冰上融化的NMY51感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5ug，Carrier DNA（95-100度5min快速冰浴，重复一次）10 ul ，PEG/liAC  500ul并吸打几次混匀，30度水浴30 分钟（15 min时翻转6-8次混匀）。

2. 将管放42度水浴15min  （7.5 min时翻转6-8次混匀）。  

3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清，ddH2O 400ul 重悬，离心 30s 弃上清。                      

4. ddH2O 50ul重悬，涂板,29℃培养48-80h。

Preparation of Media：

YPDA （1L）:

 Tryptone               20g

 yeast extract            10g 

 0.2% adenine           15ml

 补水到 950ml，  用盐酸调PH到6.5

 Agar                20g (for plates only)

 121度，15分钟高压灭菌，

 待培养基温度降到55度时，加

 入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml

0.2% adenine(1L)

 Adenine    2g

 补水     到1L

 溶解后高压灭菌

 或0.22um 滤膜过滤除菌

   NMY51酵母感受态细胞注意事项

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. NMY51酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。

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