蛋白质电泳相关试剂及缓冲液<说明：如下常规试剂配制方法仅供参考>

30%（W/V）丙烯酰胺溶液

l 组分浓度 30%（W/V） Acryl amide

l 配制量   100ml

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于250ml烧杯中。

                Acryl amide           38g

                BIS                   2g

            2.向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45um滤膜过滤除杂。

            3.置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性，配制时应戴手套操作）

40%（W/V）丙烯酰胺溶液

l 组分浓度 40%（W/V） Acryl amide

l 配制量   100ml

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于200ml烧杯中。

                Acryl amide           29g

                BIS                   1g

            2.向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45um滤膜过滤除杂。

            3.置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性，配制时应戴手套操作）

10%（W/V）过硫酸铵

l 组分浓度 10%（W/V）过硫酸铵

l 配制量   10ml

l 配制方法 1.称取1g过硫酸铵。

            2.加入10ml的去离子水后搅拌溶解，贮存于4℃。

（注意：10%（W/V）过硫酸铵溶液在4℃保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）

5X Tris—Glycine Buffer

l 组分浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5%(W/V)  SDS

l 配制量   1L

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于1L的烧杯中

                Tris                 15. 1g

                Glycine                94g

                SDS                  5.0g

            2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。

            3.加入去离子水定容至1L后，室温保存。

2X SDS—PAGE Loading Buffer

l 组分浓度 100mM         Tris—HC1  (pH6.8)

            4%(W/V)                    SDS

            0.2%(W/V)                溴酚蓝

            20%(V/V)                   甘油

            2%(W/V)            β—巯基乙醇

l 配制量   5ml

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

                1M Tris—HC1  (pH6.8)     0.5ml

                SDS                       0.2g

                溴酚蓝                    10mg

                甘油                      1ml

            2.加入去离子水溶解定容至5ml。

            3.小份分装，0.5ml一管，室温保存。

            4.使用前将25ul的β—巯基乙醇加入混匀。

5X SDS—PAGE Loading Buffer

l 组分浓度 250mM         Tris—HC1  (pH6.8)

            10%(W/V)                    SDS

            0.5%(W/V)                溴酚蓝

            50%(V/V)                   甘油

            5%(W/V)            β—巯基乙醇

l 配制量   5ml

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

                1M Tris—HC1  (pH6.8)     1.25ml

                SDS                      0.5g

                溴酚蓝                    25mg

                甘油                      2.5ml

            2.加入去离子水溶解定容至5ml。

            3.小份分装，0.5ml一管，室温保存。

            4.使用前将25ul的β—巯基乙醇加入混匀。

核酸电泳相关试剂及缓冲液<说明：如下常规试剂配制方法仅供参考>

50X TAE Buffer (pH8.5)

l 组分浓度 2M Tris—醋酸，100mM EDTA

l 配制量   1L

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中

                Tris                    242.2g

                Na2EDTA·2H20         37.2g

            2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml的醋酸，充分搅匀。

            3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

10X TBE Buffer (pH8.3)

l 组分浓度 890mM Tris—醋酸，20mM EDTA

l 配制量   1L

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中

                Tris                     108g

                Na2EDTA·2H20           7.44g

硼酸                      55g

            2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解.

            3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

10X MOPS Buffer

l 组分浓度 200mM MOPS，20mM NaAc，10mM EDTA

l 配制量   1L

l 配制方法 1.称取41.8g MOPS，置于1L烧杯中，加入约800ml DEPC 处                           

理水，搅拌溶解。

            2.用1M NaOH 调节pH至7.0。

            3.再加入以下试剂

              1M NaAc (DEPC处理)         20ml

              0.5M EDTA(Ph8.0)(DEPC处理) 20ml

            4.用DEPC处理水将溶液定容至1L。

            5.用0.45um滤膜过滤除杂，室温避光保存。

（注意：溶液见光或高温灭菌后会变黄，仍可以使用，但变黑则不能使用）

溴化乙锭（10mg/ml）

l 组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭

l 配制量   100ml

l 配制方法 1.称取1.0g溴化乙锭，加入到200ml容器中。

           2.加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。

            3.将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。

            4.溴化乙锭最终工作浓度为0.5ug/ml。

6X DNA Loading Buffer(单染料)

l 组分浓度  0.25%（W/M）        溴酚蓝

               30%（W/M）         甘油

l 配制量   10ml

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

                溴酚蓝                    25mg

            2.向离心管中加入6ml去离子水，充分搅拌溶解。

            3.加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。

6X DNA Loading Buffer(双染料)

l 组分浓度  0.25%（m/M）               溴酚蓝

             0.25%（m/M）        二甲苯腈蓝FF

30%（m/M）                 甘油

l 配制量   10ml

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

                溴酚蓝                    25mg

                二甲苯腈蓝FF              25mg

           2.向离心管中加入6ml去离子水，充分搅拌溶解。

           3.加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。

10X RNA Loading Buffer(单染料)

l 组分浓度  10mM                 EDTA

             0.25%（m/M）       溴酚蓝

             30%（m/M）           甘油

l 配制量   10ml

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

                0.5M EDTA（pH8.0）       200ul

                溴酚蓝                    25mg

            2.向离心管中加入4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。

            3.加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。

10X RNA Loading Buffer(单染料)

l 组分浓度  10mM                    EDTA

             0.25%（W/V）          溴酚蓝

             0.25%（W/V）   二甲苯腈蓝FF

             50%（V/V）             甘油

l 配制量   10ml

l 配制方法 1.称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中

                0.5M EDTA（pH8.0）       200ul

                溴酚蓝                    25mg

                二甲苯腈蓝FF              25mg

            2.向离心管中加入4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。

            3.加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。

(六)分子生物学常用试剂<说明：如下常规试剂配制方法仅供参考>

氨苄青霉素

l 组分浓度 100mg/ml氨苄青霉素

l 配制量   50ml

l 配制方法 1.称取5g Ampicillin 置于50ml塑料离心管中。

            2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

            3.0.22um滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于-20℃保存。

卡那霉素

l 组分浓度 50mg/ml卡那霉素

l 配制量   50ml

l 配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。

            2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

            3.0.22um滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于-20℃保存。

RNase A

l 组分浓度 10mg/mlRNase A

l 配制量   50ml

l 配制方法 1.称取0.5gRNase A置于50ml塑料离心管中。

            2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

            3.100℃煮沸15min，缓慢冷却至室温，小份分装（1ml一管）后，置于-20℃保存。

IPTG

l 组分浓度 24mg/ml IPTG

l 配制量   50ml

l 配制方法 1.称取1.2g IPTG置于50ml塑料离心管中。

            2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50ml。

            3.用0.22um滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于-20℃保存。

X—Gal

l 组分浓度 20mg/ml X—Gal

l 配制量   50ml

l 配制方法 1.称取1g X—Gal置于50ml塑料离心管中。

            2.加入40mlDMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解之后定容至50ml。

            3.小份分装（1ml一管）后，置于-20℃保存。

DTT

l 组分浓度 1M DTT

l 配制量   10ml

l 配制方法 1.称取1.54g DTT置于15ml塑料离心管中。

            2.加入8ml的10mM NaAc(pH5.2)，充分混合溶解之后定容至10ml。

            3.用0.22um滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于-20℃保存。

EDTA溶液

l 组分浓度 0.5M EDTA

l 配制量   1L

l 配制方法 1.称取186.1g Na2EDTA·2H2O置于1L烧杯中。

            2.加入800ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。

            3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）,当pH接近8.0时，EDTA方可王权溶解，加入去离子水定容至1L。

            4.小份分装后，高温高压灭菌，室温保存。