制品说明：本制品使用通过基因重组技术克隆表达的点突变型RNase H活性缺失的M-MuLV反转录酶TUREscript Hˉ RTase。野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，与M-MuLV 相比，具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等。
适用范围：第一链cDNA合成。可用于低拷贝基因的检测。
特点：合成cDNA片段长度最高可达12 kb。
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例)
1.加入
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Components
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Volume
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Total RNA/mRNA
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50 ng-5 μg/5-500 ng
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Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)or
Random Primer(0.1 μg/μl) or
GSP(Gene Specific Primer)
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1 μl
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1 μl
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2 pmol
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dNTP Mixture (10 mM each)
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1 μl
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5× RT Buffer
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4 μl
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RNase Inhibitor(40 units/μl)
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0.5 μl
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TUREscript Hˉ RTase
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1 μl
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RNase free H2O to final volume
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20 μl
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2. 轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育50 min。
3.65℃加热15 min失活TUREscript Hˉ RTase。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
4.逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存
RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
建议PCR条件(以50 μl反应体系为例)
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Components
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Volume
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Final Concentration
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cDNA Template
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2 μl
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as required
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Forward Primer (10 μM)
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1 μl
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0.2 μM each
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Reverse Primer (10 μM)
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1 μl
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0.2 μM each
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10×Taq Buffer (含Mg2+)
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5 μl
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1×
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2.5 mM dNTPs
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4 μl
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0.2 mM
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Taq DNA Polymerase
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0.5 μl
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2.5 units
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ddH2O to final volume
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50 μl
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Not applicable
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1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构，可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀，65℃变性5分钟，冰上冷却，短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
转录酶III试剂盒
产品名称：反转录酶III试剂盒
产品型号：invitrogen 18080-051
产品说明： 反转录酶III试剂盒(invitrogen 18080-051) SuperScript® III First-Strand Synthesis System 描述用于 RT-PCR 的 SuperScript® III 第一链合成系统 (SuperScript® I...……
反转录酶III试剂盒【详细说明】
反转录酶III试剂盒(invitrogen 18080-051)
SuperScript® III First-Strand Synthesis System
用于 RT-PCR 的 SuperScript® III 第一链合成系统 (SuperScript® III First-Strand Synthesis System for RT-PCR) 提供从总 RNA 或 poly(A)+ RNA 合成高质量第一链 cDNA 所需的全部组分。 和 PCR 一起使用时，这种经过功能测试的系统能检测稀少的 mRNA，并生成足以进行克隆的材料。 SuperScript® III 第一链合成系统：
使用 SuperScript® III RT 获得更高的 cDNA 产量，包括第一链 cDNA 合成所需的所有组分
由经过优化的试剂组成，性能更可靠，包含精简的方案从少至 1.0 pg 的总量中检测模板分子