固相RNase清除剂
华越洋
ZH01-250S,250ml套装,含配套喷壶擦拭布,当日秒杀价690.00
固相RNase清除剂是北京华越洋开发的特殊的RNase灭活剂。它含有多种成分,能高效灭活固体表面的RNase污染,保障RNA工作环境的清洁。使用广泛,能同时灭活RNase T1、 RNase H、BAL31、S1、Mung bean nuclease等RNase和DNase。其效力和速度远远高于常用的DEPC,无毒,使用简单,处理后不需要高压灭菌。
使用方法:
水的处理:直接将固相RNase清除剂原液按1:1000的比例加入到需要处理的水中,混合均匀后室温放置24小时即可直接使用,得到的水可以配制电泳溶液和裂解液。但如果需要溶解RNA,建议使用华越洋的RNase fee Water 500ml装。
工作平台的清洁:直接将固相RNase清除剂原液或10倍的新鲜稀释液喷于台面,5分钟后用普通吸水纸擦净,最后用沾有固相RNase清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净,晾干。
注意:由于一般的工作平台RNase污染都很严重,华越洋建议最好是使用固相RNase清除剂原液或十倍的新鲜稀释液(稀释液的存放时间不要超过一天),不要使用稀释度大于十倍的稀释液。
实验仪器的清洁:
用浸有固相RNase清除剂原液或10倍的新鲜稀释液的纸擦拭仪器表面,再用吸水纸擦净,最后用沾有固相RNase清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净,晾干。用固相RNase 清除剂原液处理金属器械的时间不能超过5分钟。
注意:由于一般的实验仪器RNase污染都很严重,华越洋建议使用固相RNase 清除剂原液或十倍的新鲜稀释液(新鲜稀释液的存放时间不要超过一天),不要使用稀释度大于十倍的稀释液。
玻璃和塑料器皿的清洁:
将器皿浸泡在固相RNase 清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中,静置处理5分钟后取出,再用固相RNase清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液浸泡二次以上,倒立晾干后备用。
注意:由于一般的清洗后的玻璃和塑料器皿的RNase污染都比较严重(但一般比工作平台和实验仪器干净),华越洋建议第一次浸泡使用固相RNase 清除剂的10倍或100倍新鲜稀释液(新鲜稀释液的存放时间不要超过一天),不要使用稀释度大于1000倍的稀释液。
移液枪的清洁:
根据生产厂家的使用手卸下移液枪的前端,留下接口塞和圈套后将其浸放在固相RNase清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中一分钟,再用固相RNase清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液彻底冲洗后,晾干,装回移液枪。
塑料离心管和滴头的清洁:
将反应塑料离心管和滴头充分浸泡在固相RNase清除剂的1000倍的新鲜稀释液中5分钟以上(最好不要有气泡), 然后再用固相RNase清除剂1000倍或10000倍的新鲜稀释液充分浸泡两次,试管或离心管可立即使用或干燥后备用。
如何检测本产品灭活RNase的效果
在两个1.5mL塑料离心管中分别加入RNase溶液,使RNase总量在10-100 ug之间,自然晾干(需要一天左右)或加热使水份蒸发,一个样品加入1 mL 本产品原液,另一个样品加入1 mL无RNase的水(对照),室温静置五分钟(注意不要让管壁上产生气泡,因为它会阻挡溶液与管壁上RNase分子的结合),然后小心吸出溶液并加入1 mL水,静置1分钟后小心吸出,重复水洗步骤一次,最后加入2.5 ug总RNA样品, 37℃保温30分钟后加RNA电泳上样液,电泳观察RNA分子的完整性。完整的RNA表示该管中RNase已经被灭活。
固相RNase 清除剂稀释度与RNase的灭活效果的关系
|
RNase量(1.5mL离心管中)
|
稀释度
|
0.5 ug
|
5 ug
|
50 ug
|
100 ug
|
原液
|
+
|
+
|
+
|
+
|
10倍稀释
|
+
|
+
|
+
|
+
|
100倍稀释
|
+
|
+
|
+
|
-
|
1000倍稀释
|
+
|
-
|
-
|
-
|
表注:所有灭活条件均为室温静置放置5分钟,“+”表示百分百灭活,“-”表示部分灭活或不能灭活。RNase为液体溶液加入到1.5 mL塑料离心管中晾干而得,稀释液为新鲜稀释。
远离EPC的三大理由
1.DEPC对人体有害。DEPC为高活性烷化试剂,能对蛋白质进行共价修饰,使其组胺基团的乙氧基甲酸化(RNase A活性位点有两个组氨酸,故能被灭活);同时它还能使RNA分子中没配对的腺嘌呤羧甲基化,改变其活性,严重时甚至会影响RNA形成杂交双链的能力。由于上述反应没有选择性,故对人体十分有害,归为强致癌物,使用时必须十分小心。
2.不能用DEPC处理下列溶液:一是含一级胺的试剂,如MOPS,TRIS, HEPES,PBS等,因其所含一级胺是DEPC攻击的目标,它们之间会发生化学反应;二是不能高压灭菌的溶液(如DTT,dNTP,MgCl2等),因为DEPC必须通过高压灭菌去除;三是不能用于某些高浓度的溶液(如0.1 M NH4Ac或NaAc),在这些溶液中DEPC的半衰期只有几分钟;四是不能用于pH值在4及以下的溶液,在此条件下DEPC对RNase没有灭活作用;五是DEPC不能与Polycarbonate和Polystyrene等塑料材料接触。
3.DEPC溶液不适合用于某些实验;一不能用于测OD,因为OD读数跟pH有关,DEPC在溶液中分解后变成乙醇和CO2,部分CO2与水反应形成碳酸,导致pH降低,进而降低OD值。二不能用于体外转录,Ambion报道0.1% DEPC-treated water能使转录效率降低40%,这可能与DEPC降解产物有关。